蛋白纯化网站排名大全
8482023-12-28
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〖One〗、His标签由于其分子量小且费用便宜,是最常用的标签之一。His标签通常由6-10个氨基酸组成,利用多聚组氨酸对二价金属离子具有高选取性亲和力的特点,我们可以把金属离子(常用为Ni离子)通过NTA或者IDA连接在琼脂糖树脂上进行His标签的纯化。由于His标签较小,所以通常纯化后不用切除标签,并且可以和其他标签联用构成双标签。如果His标签纯化有杂带,大家可以考虑使用多个咪唑浓度梯度洗脱或者用仪器进行咪唑线性洗脱。
〖Two〗、GST标签也是常用的标签。GST标签全称为GlutathioneS-transferase(谷胱甘肽巯基转移酶),可以特异性的结合其酶活底物谷胱甘肽。GST填料上固定有谷胱甘肽配基,可用于特异性纯化带有GST标签的蛋白。
〖Three〗、GST标签可以提高蛋白表达的可溶性和表达量,并且也具有较高的纯度。一般用GST标签纯化后的条带都比较单一,可以一步得到非常高的纯度。
〖Four〗、不过由于GST标签比较大,所以在纯化后通常需要将纯化后的蛋白上的GST标签切除。可以选取柱上酶切或者柱下酶切的方法。在构建质粒时,需要考虑到在GST标签和目的蛋白中间加上特定的蛋白酶酶切位点。
〖Five〗、如果您想要得到非常高的纯度,或者您的蛋白有相近的难以去除的杂带,那么选取Strep标签就再合适不过了。Strep标签为一段长度仅为8个氨基酸的短肽,可以结合链霉亲和素。而现在常用的Strep填料的配基为链霉亲和素改造之后的Strep-Tactin配基,大大增加了和Strep标签的结合能力。
〖Six〗、此外,现在的Twin-Strep标签也受到很多客户的喜欢。Twin-Strep标签是由两段Strep肽段和之间的连接序列构成的,和普通的Strep标签相比具有纯度更高,可耐受变性剂等特点。
〖Seven〗、MBP标签全称为maltoseBindingProtein(麦芽糖结合蛋白),以其超大分子量(42KD)而闻名于纯化界。MBP填料上的糊精配基可以特异性的结合MBP标签蛋白。MBP标签被广泛报道具有促进重组蛋白溶解的功能,在过表达目的蛋白的过程中也有助于减少包涵体。
〖One〗、His标签蛋白纯化原理:组氨酸(His)的残基上带有1个咪唑基团,可以和Ni2+、Co2+等过渡金属离子形成配位键而选取性的结合在金属离子上,这些金属离子能够用鳌合配体固定在层析介质上,因此带有His标签的蛋白在经过装配了金属离子的层析介质时可以选取性的结合在介质上,而其他的杂质蛋白则不能结合或仅能微弱结合。
〖Two〗、结合在介质上的His标签蛋白可以通过提高缓冲液中的咪唑浓度进行竞争性洗脱,从而得到较高纯度的His标签蛋白。
原理:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动。
步骤:根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。
a原理:离子交换层析,利用蛋白质的两性游离性质,在某一特定PH时,各蛋白质的电荷量及性质不同,故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析,含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来
步骤:分子筛,又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内,滞留时间长,大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。
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